دستگاه HPLC مخفف عبارت High Performance Liquid Chromatography است. “کروماتوگرافی مایع” تکنیکی برای جداسازی، “کروماتوگرام” حاصل کروماتوگرافی و “کروماتوگرافی” ابزاری است که برای انجام کروماتوگرافی استفاده می شود. دستگاه HPLC یکی از دستگاه ها در بخش دستگاهی high-tech مجتمع آزمایشگاهی رادگستر است.
موارد کاربرد در آزمایشگاه رادگستر :
مروری بر دستگاه HPLC
در میان فن‌آوری‌های مختلف توسعه‌یافته برای کروماتوگرافی، دستگاه‌های اختصاص داده شده برای جداسازی مولکولی به نام ستون‌ها و پمپ‌های با کارایی بالا برای تحویل حلال با سرعت جریان پایدار، برخی از اجزای کلیدی کروماتوگراف‌ها هستند. با پیچیده‌تر شدن فناوری‌های مرتبط، سیستمی که معمولاً به عنوان کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا شناخته می‌شود، به سادگی «LC» نامیده می‌شود. امروزه، کروماتوگرافی مایع با کارایی فوق العاده بالا (UHPLC) که قادر به تجزیه و تحلیل با سرعت بالا است، نیز گسترده تر شده است.
فقط ترکیبات محلول در حلال ها را می توان با HPLC آنالیز کرد. HPLC ترکیبات محلول در یک نمونه مایع را جدا می کند و امکان تجزیه و تحلیل کیفی و کمی را در مورد اینکه چه اجزایی و چه مقدار از هر جزء در نمونه وجود دارد را می دهد.
شکل 1 یک نمای کلی از فرآیند HPLC را نشان می دهد. حلال مورد استفاده برای جداسازی اجزای یک نمونه مایع برای تجزیه و تحلیل HPLC فاز متحرک نامیده می شود. فاز متحرک به یک ستون جداسازی، که در غیر این صورت به عنوان فاز ثابت شناخته می شود، و سپس به آشکارساز با نرخ جریان پایدار که توسط پمپ تحویل حلال کنترل می شود، تحویل داده می شود. مقدار مشخصی از نمونه به ستون تزریق می شود و ترکیبات موجود در نمونه جدا می شوند. ترکیبات جدا شده در ستون توسط یک آشکارساز در پایین دست ستون شناسایی شده و هر ترکیب شناسایی و کمی سازی می شود.
دستگاه HPLC
“نمای کلی فرآیند HPLC” (همانطور که در شکل 1 نشان داده شده است) و مکانیسم های آن اکنون پوشش داده شده است. با پرداختن به جزئیات بیشتر، HPLC از اجزای مختلفی تشکیل شده است، از جمله یک پمپ انتقال حلال، یک واحد گاز زدایی، یک نمونه انژکتور، کوره ستونی، آشکارساز و پردازشگر داده شکل 2 نمودار جریان HPLC و نقش هر جزء را نشان می دهد.
همانطور که برای HPLC، پمپ فاز متحرک را با نرخ جریان کنترل شده (a) تحویل می دهد. هوا می تواند به راحتی در فاز متحرک تحت فشار اتمسفر استانداردی که در آن زندگی می کنیم حل شود. اگر فاز متحرک حاوی حباب های هوا باشد و وارد پمپ تحویل شود، ممکن است مشکلاتی مانند نوسانات سرعت جریان و نویز/ رانش پایه ایجاد شود. واحد گاز زدایی با حذف حباب های هوا در فاز متحرک (b) به جلوگیری از این مشکل کمک می کند. پس از حذف هوای محلول، فاز متحرک به ستون تحویل داده می شود. سپس انژکتور نمونه یک محلول استاندارد یا محلول نمونه را وارد فاز متحرک (c) می کند. نوسانات دما می تواند بر جداسازی ترکیبات در ستون تاثیر بگذارد. ستون را در کوره ستونی قرار می دهند تا دما را ثابت نگه دارد(d). ترکیبات شسته شده از ستون توسط یک آشکارساز که در پایین دست ستون (e) قرار می گیرد، شناسایی می شوند. یک ایستگاه کاری سیگنال آشکارساز را پردازش می کند تا کروماتوگرام را برای شناسایی و تعیین کمیت ترکیبات (f) بدست آورد.
جداسازی HPLC
چگونه کروماتوگرام را بخوانیم
کلمه کروماتوگرام به معنای نموداری است که از طریق کروماتوگرافی به دست می آید. شکل 4 نمونه ای از کروماتوگرام را نشان می دهد. کروماتوگرام یک نمودار دو بعدی با محور عمودی است که غلظت را بر حسب شدت سیگنال آشکارساز نشان می دهد و محور افقی نشان دهنده زمان تجزیه و تحلیل است. هنگامی که هیچ ترکیبی از ستون شسته نمی شود، خطی موازی با محور افقی ترسیم می شود. به این خط مبنا می گویند. آشکارساز بر اساس غلظت ترکیب هدف در نوار شستشو پاسخ می دهد. طرح به دست آمده بیشتر شبیه به شکل زنگ است تا مثلث. به این شکل “قله” می گویند.
زمان ماند (tR) فاصله زمانی بین نقطه تزریق نمونه و اوج پیک است. زمان لازم برای ترکیبات باقیمانده (ترکیبات بدون برهمکنش برای فاز ساکن) برای رفتن از انژکتور به آشکارساز، زمان مرده (t0) نامیده می شود.
ارتفاع قله (h) فاصله عمودی بین راس قله و خط پایه است و ناحیه قله (A) که به رنگ آبی روشن رنگ شده است ناحیه محصور شده توسط قله و خط پایه است. این نتایج برای تجزیه و تحلیل کمی و کیفی اجزای نمونه استفاده خواهد شد.
کاربرد دستگاه HPLC چیست؟
HPLC یک تکنیک کروماتوگرافی متداول و بسیار قدرتمند است که کاربردهایی در زمینه هایی مانند داروسازی، تجزیه و تحلیل زیستی، مواد غذایی و آشامیدنی، بالینی، پزشکی قانونی، محیط زیست و آزمایشگاه های توسعه دارو دارد.
کاربردهای HPLC در داروسازی چیست؟
HPLC شکل کروماتوگرافی مایع است که به طور کلی در صنعت داروسازی استفاده می شود، زیرا می تواند نتایج دقیق مورد نیاز را ارائه دهد. نتایج را می توان برای تجزیه و تحلیل محصولات دارویی نهایی و مواد تشکیل دهنده آنها به صورت کمی و کیفی در طول فرآیند ساخت مورد استفاده قرار داد.
یکی از کاربردهای HPLC در صنعت چیست؟
- توسعه دارویی
یکی از رایج ترین کاربردهای HPLC در فرآیند تولید محصولات دارویی است. HPLC روشی مطمئن و دقیق برای بررسی خلوص محصول است. در نتیجه، می تواند به تولیدکنندگان دارویی کمک کند تا خالص ترین محصولات را توسعه دهند.
کاربردهای دیگر دستگاه HPLC در آزمایشگاه پزشکی قانونی چیست؟
از HPLC می توان برای تجزیه و تحلیل مواد منفجره استفاده کرد زیرا مواد مختلف مورد استفاده در مواد منفجره دارای خواص متفاوتی هستند و بنابراین زمان نگهداری متفاوتی خواهند داشت. برخی از داروها را می توان با HPLC نیز تشخیص داد. کروماتوگرافی گازی یا کروماتوگرافی گازی مایع، شامل استفاده از فاز ثابت مایع و فاز متحرک گازی است.
مزایای HPLC نسبت به کروماتوگرافی لایه نازک (TLC)
وضوح. در جداسازی TLC، تمایز بین نوارها و لکه‌های همپوشانی دشوار می‌شود. …
سرعت تحلیل …
کمی سازی نتایج …
حساسیت …
نرم افزار. …
انتخاب فاز و ستون ثابت …
ذخیره سازی نتایج …
تکنیک های خط فاصله.
