[vc_row css=”.vc_custom_1509351902915{background-position: center !important;background-repeat: no-repeat !important;background-size: cover !important;}”][vc_column][vc_custom_heading source=”post_title” font_container=”tag:h2|font_size:30px|text_align:center|line_height:1.3em” use_theme_fonts=”yes”][vc_single_image image=”2238″ img_size=”full” alignment=”center”][/vc_column][/vc_row][vc_row][vc_column][vc_row_inner][vc_column_inner width=”1/6″][/vc_column_inner][vc_column_inner width=”2/3″][vc_column_text]

آزمایشگاه رادگستر با بهره گیری از نیروی متخصــــص و توانمند و استفاده از جدیــــدتریــــن تجهیــــزات در بخـــش تشخیـــص مــــولکـولــــــی به روش Real–Time PCR، اولیــن مرکـــز در اســتان اصفهـــان می باشد که مجـــوزهای مربوط به تایپینــگ (تشخیص کمی و کیفی DNA حیوانات مختلف) را کسب کرده است. این توانمندی در کنار توانمندی بافت شناسی این بسته را در اختیار مراکز و مراجع نظارتی و ذیصلاح قرار می دهد که بتوانند انواع تقلبات از نظر نوع DNA و وجود بافت غیر مجاز را تشخیص و تفریق دهند. همچنـــین این مرکـــــز قادر به ردیابی ارگانیســــم های تغییر ژنتیکـــی یافته (GMO) و محصولات حاصل از آنها می باشد. یکی دیگر از آزمایشاتی که با Real-time PCR انجام میشود تعیین جنسیت پرندگان میباشد که میتوانید مطالعه بفرمایید.

تشخیـــص مــــولکـولــــــی

[/vc_column_text][vc_column_text]

بخش Real-time PCR

Real-time PCR به یکی از پرکاربردترین روش‌های کمی‌سازی ژن تبدیل شده است، زیرا دامنه دینامیکی زیادی دارد، حساسیت فوق‌العاده‌ای دارد، می‌تواند بسیار خاص توالی باشد، پردازش پس از تکثیر کمی دارد یا بدون آن است، و قابل افزایش نمونه است. توان عملیاتی با این حال، سود بهینه از این مزایا مستلزم درک روشنی از بسیاری از گزینه‌های موجود برای اجرای آزمایش PCR بلادرنگ است. با شروع با تئوری پشت Real-time PCR، این بررسی اجزای کلیدی یک آزمایش PCR بلادرنگ را مورد بحث قرار می‌دهد، از جمله PCR یک مرحله‌ای یا دو مرحله‌ای، کمیت مطلق در مقابل نسبی، مدل‌های ریاضی موجود برای کمی‌سازی نسبی و محاسبات راندمان تقویت، انواع نرمال سازی یا تصحیح داده ها و شیمی های تشخیص. علاوه بر این، بسیاری از علل تغییرات و همچنین روش‌های محاسبه تنوع درون و بین سنجش مورد بررسی قرار می‌گیرند.

تعاریف Real-time PCR

ظهور Real-time PCR و زمان واقعی PCR رونویسی معکوس (Real-time RT-PCR) زمینه اندازه گیری بیان ژن را به طرز چشمگیری تغییر داده است. Real-time PCR تکنیک جمع‌آوری داده‌ها در طول فرآیند PCR است، بنابراین تقویت و تشخیص در یک مرحله واحد ترکیب می‌شود. این با استفاده از انواع شیمی های فلورسنت مختلف به دست می آید که غلظت محصول PCR را با شدت فلورسانس مرتبط می کند . واکنش ها با نقطه زمانی (یا چرخه PCR) که در آن تقویت هدف برای اولین بار شناسایی می شود مشخص می شود. این مقدار معمولاً به عنوان آستانه چرخه (Ct) نامیده می شود، زمانی که در آن شدت فلورسانس بیشتر از فلورسانس پس زمینه است. در نتیجه، هرچه مقدار DNA هدف در ماده اولیه بیشتر باشد، افزایش قابل توجهی در سیگنال فلورسنت سریع‌تر ظاهر می‌شود و Ct کمتری به دست می‌آید .

مزایای Real-time PCR

مزایای زیادی استفاده از PCR بلادرنگ نسبت به روش های دیگر برای تعیین کمیت بیان ژن وجود دارد. این می تواند داده های کمی با محدوده دینامیکی دقیق 7 تا 8 مرتبه بزرگی تولید کند و نیازی به دستکاری پس از تقویت ندارد. سنجش‌های Real-time PCR 10000 تا 100000 برابر حساس‌تر از سنجش‌های حفاظتی RNase هستند ، 1000 برابر حساس‌تر از هیبریداسیون دات بلات، و حتی می‌توانند یک نسخه از یک رونوشت خاص را شناسایی کنند. علاوه بر این، سنجش‌های PCR بلادرنگ می‌توانند به طور قابل اعتماد تفاوت‌های بیان ژن را به کوچکی 23 درصد بین نمونه‌ها شناسایی کنند و ضرایب تغییرات کمتری (cv؛ SYBR® Green در 14.2 درصد؛ TaqMan® در 24 درصد) نسبت به سنجش‌های نقطه پایانی دارند. مانند تراکم باند (44.9%) و هیبریداسیون پروب (45.1%) . PCR بلادرنگ همچنین می‌تواند بین RNA‌های پیام‌رسان (mRNA) با توالی‌های تقریباً یکسان تمایز قائل شود، به الگوی RNA بسیار کمتری نسبت به روش‌های دیگر تجزیه و تحلیل بیان ژن نیاز دارد، و با توجه به تجهیزات مناسب می‌تواند کارایی نسبتاً بالایی داشته باشد. عیب اصلی PCR بلادرنگ این است که به تجهیزات و معرف های گران قیمت نیاز دارد. علاوه بر این، به دلیل حساسیت بسیار بالای آن، طراحی تجربی صدا و درک عمیق تکنیک‌های نرمال‌سازی برای نتیجه‌گیری دقیق ضروری است.
مراحل کلی انجام شده در طی یک آزمایش PCR بلادرنگ، از جداسازی RNA تا تجزیه و تحلیل داده ها، در شکل زیر نشان داده شده است. این بررسی به منظور ارائه نمای کلی از بسیاری از جنبه های PCR بلادرنگ، برجسته کردن نظریه PCR، روش های کمی سازی و مدل‌ها، نرمال‌سازی داده‌ها، انواع شیمی تشخیص، و علل تغییرات.

[/vc_column_text][/vc_column_inner][vc_column_inner width=”1/6″][/vc_column_inner][/vc_row_inner][/vc_column][/vc_row][vc_row][vc_column][vc_custom_heading text=”تصاویر بخش تشخیص مولکولی” font_container=”tag:h4|font_size:16|text_align:right|color:%23000000″ use_theme_fonts=”yes”][vc_gallery interval=”3″ images=”2239,1856,1858″ img_size=”full”][/vc_column][/vc_row]